Princípy a metódy kvantitatívnej analýzy kvapalinovou chromatografiou

Separačný mechanizmus kvapalinovej chromatografie je založený na rozdiele v afinite zložiek v zmesi pre dve fázy.

Podľa rôznych stacionárnych fáz sa kvapalinová chromatografia delí na kvapalinovú chromatografiu, kvapalinovú chromatografiu a chromatografiu s viazanou fázou.Najpoužívanejšie sú kvapalinová-pevná chromatografia so silikagélom ako plnivom a chromatografia s viazanou fázou s mikrooxidom kremičitým ako matricou.

Podľa formy stacionárnej fázy možno kvapalinovú chromatografiu rozdeliť na stĺpcovú chromatografiu, papierovú chromatografiu a chromatografiu na tenkej vrstve.Podľa adsorpčnej kapacity ju možno rozdeliť na adsorpčnú chromatografiu, rozdeľovaciu chromatografiu, iónomeničovú chromatografiu a gélovú permeačnú chromatografiu.

V posledných rokoch bol do systému kvapalinovej kolónovej chromatografie pridaný vysokotlakový kvapalinový prietokový systém, aby mobilná fáza rýchlo prúdila pod vysokým tlakom, aby sa zlepšil separačný efekt, takže vysokoúčinná (tiež známa ako vysokotlaková) kvapalinová chromatografia sa objavilo.

ČASŤ
01 Princíp kvantitatívnej analýzy kvapalinovej chromatografie

Na kvantifikáciu na kvalitatívnom základe sa ako štandardy vyžadujú čisté látky;

Kvantifikácia kvapalinovou chromatografiou je relatívne kvantitatívna metóda: to znamená, že množstvo analytu v zmesi sa odhaduje zo známeho množstva čistej štandardnej vzorky.

ČASŤ
02 Základ pre kvantifikáciu kvapalinovou chromatografiou

Množstvo meranej zložky (W) je úmerné hodnote odozvy (A) (výška píku alebo plocha píku), W=f×A.

Kvantitatívny korekčný faktor (f): Je to konštanta proporcionality kvantitatívneho výpočtového vzorca a jeho fyzikálny význam je množstvo meranej zložky reprezentovanej hodnotou jednotkovej odozvy (plocha vrcholu).

Kvantitatívny korekčný faktor možno získať zo známeho množstva štandardnej vzorky a jej hodnoty odozvy.

Zmerajte hodnotu odozvy neznámej zložky a množstvo zložky možno získať pomocou kvantitatívneho korekčného faktora.

ČASŤ
03 Bežné pojmy v kvantitatívnej analýze

Vzorka (vzorka): roztok obsahujúci analyt na chromatografickú analýzu.Rozdelené na štandardné a neznáme vzorky.

Štandard: Čistý produkt so známou koncentráciou.Neznáma vzorka (neznáma): Zmes, ktorej koncentrácia sa má testovať.

Hmotnosť vzorky: Pôvodné váženie vzorky, ktorá sa má testovať.

Riedenie: Faktor riedenia neznámej vzorky.

Komponent: chromatografický pík, ktorý sa má kvantitatívne analyzovať, to znamená analyt, ktorého obsah nie je známy.

Množstvo zložky (množstvo): obsah (alebo koncentrácia) látky, ktorá sa má testovať.

Integerity : Výpočtový proces merania plochy píku chromatografického píku počítačom.

Kalibračná krivka: Lineárna krivka obsahu zložky verzus hodnota odozvy, vytvorená zo známeho množstva štandardnej látky, použitá na stanovenie neznámeho obsahu analytu.

ČASŤ
04 Kvantitatívna analýza kvapalinovej chromatografie

1. Vyberte chromatografickú metódu vhodnú na kvantitatívnu analýzu:

l Potvrďte vrchol detekovanej zložky a dosiahnite rozlíšenie (R) väčšie ako 1,5

l Stanovte konzistenciu (čistotu) chromatografických píkov testovaných zložiek

l určiť detekčný limit a kvantifikačný limit metódy;citlivosť a lineárny rozsah

2. Zostavte kalibračnú krivku so štandardnými vzorkami rôznych koncentrácií

3. Skontrolujte správnosť a presnosť kvantitatívnych metód

4. Na implementáciu odberu vzoriek, spracovania údajov a vykazovania výsledkov použite príslušný softvér na správu chromatografie

ČASŤ
05 Identifikácia kvantitatívnych vrcholov (kvalitatívne)

Kvalitatívne identifikujte každý chromatografický pík, ktorý sa má kvantifikovať

Najprv použite štandardnú vzorku na určenie retenčného času (Rt) chromatografického píku, ktorý sa má kvantifikovať.Porovnaním retenčného času nájdite zložku zodpovedajúcu každému chromatografickému píku v neznámej vzorke.Chromatografická kvalitatívna metóda spočíva v porovnaní retenčného času so štandardnou vzorkou.Kritérium Nedostatočnéďalšie potvrdenie (kvalitatívne)

1. Štandardná metóda pridávania

2. Súčasne používajte iné metódy: iné chromatografické metódy (zmena mechanizmu, napr.: použitie rôznych chromatografických kolón), iné detektory (PDA: porovnanie spektra, vyhľadávanie knižnice spektra; MS: analýza hmotnostného spektra, vyhľadávanie knižnice spektra)

3. Iné nástroje a metódy

ČASŤ
06 Potvrdenie konzistencie kvantitatívneho vrcholu

Potvrdenie konzistencie chromatografického píku (čistota)

Uistite sa, že pod každým chromatografickým píkom je len jedna meraná zložka

Skontrolujte, či nedochádza k interferencii zo spoločne eluovaných látok (nečistoty)

Metódy na potvrdenie konzistencie chromatografického vrcholu (čistota)

Porovnanie spektrogramov s fotodiódovými maticovými (PDA) detektormi

Identifikácia vrcholovej čistoty

2996 Teória uhla čistoty

Kvantitatívne metódy bežne používané v ČASTI 07

Metóda štandardnej krivky, rozdelená na metódu externého štandardu a metódu vnútorného štandardu:

1. Metóda externého štandardu: najpoužívanejšie v kvapalinovej chromatografii

Séria štandardných vzoriek so známymi koncentráciami bola pripravená s použitím čistých vzoriek zlúčenín, ktoré sa majú testovať, ako štandardných vzoriek.vstrekne do stĺpca až do jeho hodnoty odozvy (plocha vrcholu).
V určitom rozsahu existuje dobrý lineárny vzťah medzi koncentráciou štandardnej vzorky a hodnotou odozvy, menovite W= f×A, a vytvorí sa štandardná krivka.

Za presne rovnakých experimentálnych podmienok vstreknite neznámu vzorku, aby ste získali hodnotu odozvy komponentu, ktorý sa má merať.Podľa známeho koeficientu f možno získať koncentráciu zložky, ktorá sa má merať.

Výhody metódy externého štandardu:jednoduchá obsluha a výpočet, je to bežne používaná kvantitatívna metóda;nie je potrebné detegovať a eluovať každú zložku;vyžaduje sa štandardná vzorka;podmienky merania štandardnej vzorky a neznámej vzorky by mali byť konzistentné;objem injekcie by mal byť presný.

Nevýhody metódy externého štandardu:Vyžaduje sa, aby experimentálne podmienky boli vysoké, ako je citlivosť detektora, prietok a zloženie mobilnej fázy nemožno meniť;objem každej injekcie by mal mať dobrú opakovateľnosť.

2. Metóda vnútorného štandardu: presné, ale problematické, najčastejšie používané v štandardných metódach

Známe množstvo vnútorného štandardu sa pridá k štandardu, aby sa vytvoril zmiešaný štandard, a pripraví sa séria pracovných štandardov so známou koncentráciou.Molárny pomer štandardu k vnútornému štandardu v zmiešanom štandarde zostáva nezmenený.Nastreknite do chromatografickej kolóny a vezmite (plocha píku štandardnej vzorky/plocha píku vzorky vnútorného štandardu) ako hodnotu odozvy.Podľa lineárneho vzťahu medzi hodnotou odozvy a koncentráciou pracovného štandardu, menovite W= f×A, sa vytvorí štandardná krivka.

K neznámej vzorke sa pridá známe množstvo vnútorného štandardu a vstrekne sa do kolóny, aby sa získala hodnota odozvy zložky, ktorá sa má merať.Podľa známeho koeficientu f možno získať koncentráciu zložky, ktorá sa má merať.

Charakteristika metódy vnútorného štandardu:Počas operácie sa vzorka a vnútorný štandard zmiešajú a vstreknú do chromatografickej kolóny, takže pokiaľ je pomer množstva meranej zložky k vnútornému štandardu v zmiešanom roztoku konštantný, zmena objemu vzorky neovplyvní kvantitatívne výsledky..Metóda vnútorného štandardu kompenzuje vplyv objemu vzorky a dokonca aj mobilnej fázy a detektora, takže je presnejšia ako metóda externého štandardu.

ČASŤ
08 Faktory ovplyvňujúce výsledky kvantitatívnej analýzy

Nízka presnosť môže byť spôsobená:

Nesprávna integrácia plochy píku, rozklad vzorky alebo nečistoty zavedené počas prípravy vzorky, nádobka so vzorkou nie je uzavretá, vzorka alebo rozpúšťadlo prchanie, nesprávna príprava vzorky, problémy so vstrekovaním vzorky, nesprávna príprava vnútorného štandardu

Možné príčiny nízkej presnosti:

Nesprávna integrácia píku, problémy so vstrekovaním alebo injektorom, rozklad vzorky alebo nečistoty zavedené počas prípravy vzorky, problémy s chromatografiou, zhoršená odozva detektora